产品简介

本产品结合了饱和染料EvaGreen和抗体酶的优点，是一款适用于高分辨率熔解曲线（High Resolution Melting，HRM）分析的专业试剂盒。本品是一种2× PreMix，PCR反应液配制十分简单方便；具有分辨率高和模板高度适应性等特点。

与SYBR Green不同，EvaGreen在高浓度情况下不会抑制PCR反应；可以使双链PCR产物的结合量达到饱和状态，所以称为“饱和染料”。不会产生SYBR Green 的“染料重排”现象，能够很好的区分扩增产物之间单个碱基的差异。

本产品可用于已知SNP分析，以及未知突变基因扫描和甲基化PCR分析等研究。

试剂盒特点

1. HRM Analysis PreMix采用了抗体修饰的热启动DNA聚合酶，配合精心优化Buffer体系，具有高扩增效率，高扩增特异性和宽广的可信范围的特点。

2. HRM Mix中预混有Eva Green饱和染料，其在饱和状态下具很高的熔解曲线分辨率，可以区分单个碱基的变异。

3. 该产品独特的Buffer体系进一步增加了熔解曲线的稳定性，提高扩增的特异性。

4. 本产品附带ROX Reference Dye，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差，方便客户针对不同型号荧光定量PCR仪时选择对应浓度使用。

储存条件

收到本产品后， 请立即置于-20 ℃ 避光保存。从-20 ℃ 取出使用时， 将冻存的2x HRM Analysis PreMix和50×ROX Reference Dye溶解，然后轻轻颠倒混匀，待溶液完全均一后再行使用。如解冻后没有使用，须彻底混匀后重新冷冻(在解冻过程中盐会出现分层现象，未混匀进行冷冻，盐晶体的析出将会对酶造成损害)。如需一段时间内经常取用，可在2～8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。

注意事项

1．本产品中含有荧光染料EvaGreen，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。

2．如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。使用时请上下颠倒轻轻混匀，请不要使用振荡器进行混匀，尽量避免出现泡沫，并经瞬时离心后使用。

3．引物纯度对反应特异性影响很大，建议使用PAGE级别以上纯化的引物。

4．20 μl反应体系中，基因组DNA模板的使用量一般小于100 ng，并尽量保持不同反应之间有相同的模 量。模板纯度，OD260/280 1.6~2.0，OD260/2301.5~2.0。

5．由于HRM具有很高的灵敏性，因此在条件允许的情况下推荐使用50 ul反应体系，大的反应体系可以提高反应重复性，减少实验误差对熔解曲线的负面影响。

6．引物设计：较短的PCR产物可以提高HRM的分辨率；因此在设计PCR引物时，遵循普遍的原则外，尽量保持产物长度在80~120之间。SNP位点尽量处在PCR产物序列中间位置。